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分子诊断的标本采集
发布时间2021-06-04      点击次数:1013

合理的标本采集对保证标本的完整性和核酸的定性/定量检测的准确性是至关重要的。标本应严格按照适当的生物安全指南进行采集,不合适的标本处理会导致核酸降解,产生错误的患者检测结果。

1. 标本识别

标本采集时应明确患者身份及其标本,充分尊重患者隐私。同时应为医疗人员提供合理而充足的检测和治疗相关的信息。标本应牢固地贴上标签,内容至少包括:识别号、采集日期和时间、标本采集者姓名、标本来源等。

2. 申请单信息

申请单至少包括以下几点信息:标识号、入院登记号、患者姓名、出生日期、性别、种族、采集日期、标本类型、相关的临床和实验室信息、医生姓名、标本采集的部门、检测申请原因等。

3. 标本采集

采集人体组织或体液标本时应遵守相关的安全防范措施。同时阻止标本被处理人员的脱落细胞污染,佩戴手套,预防标本中血源性病原体的传播。特定的检测方法可能需要额外的预防措施和采集说明,如HPV检测采集宫颈标本应在醋酸试验之前。实验室采用不同的检测方法时应考虑潜在的干扰和污染来源,正确指导和培训临床医生按照特定方法或检测体系的标本采集要求进行采集。临床实验室收到标本后应尽快将标本信息输入至实验室信息系统(LIS),同时应尽快处理接收的标本。如果标本存在如溶血、冰冻血液或标记不当等情况应考虑拒收。

4. 抗凝剂

血液和骨髓穿刺(BMA)标本采集应使用合适的抗凝管或含其他添加剂的试管。试管添加剂的选择应根据分析物类型、试验、标本量而定、有研究表明肝素和亚铁血红素可能会抑制PCR反应。因此、推荐使用EDTA和ACD抗凝剂检测血浆或骨髓穿刺标本。如果被测量为细胞内RNA、或者在采集后立即加入RNA稳定溶液,采集血液或骨髓的设备应包含RNA稳定剂。

5. 组织标本

如果无法获得血液或口腔黏膜细胞(如患者死亡),可采用组织标本,或者组织为某些潜在感染物质核酸的来源时,或者组织标本的基因型同血液或口腔黏膜细胞不同。通常最佳的组织量为1-2g,但由于各种组织所含的DNA和RNA的量不同,采集组织的量也因组织而异。多细胞组织如骨髓、淋巴结、脾适用于基因组DNA检测,需要的组织量较少。少细胞标本如肌肉、纤维、脂肪组织不是基因组DNA的最佳来源,采集量最好大于1-2g。通常,大于10mg的组织至少获得10μg的RNA或DNA,如果没有广泛脂肪浸润。不同组织的蛋白质的量和类型各不相同,核酸分离方法也因组织而异。按照特定来源的组织,根据厂家建议分离DNA或RNA。

病理科医生通常从大块组织中采取有代表性的部分组织进行固定、染色、显微镜检测和病理诊断,或者选择有代表性的组织提取DNA或RNA进行分子学分析。一般选择病灶组织进行检测、非病灶组织作为对照。对照组织对某些分子检测是至关重要的,如杂合性缺失分析或微卫星不稳定性试验。


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